細(xì)胞介紹

的人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC-U1）是由人尿液來源人腎上皮細(xì)胞通過非整 合的方法誘導(dǎo)獲得。人 iPSC 在無飼養(yǎng)層、化學(xué)成分明確、并且無動(dòng)物源成分的 人多潛能干 細(xì)胞培養(yǎng)體系中培養(yǎng)，適合臨床級(jí)的干細(xì)胞研究和應(yīng)用。人 iPSC 在人多潛能干細(xì)胞培養(yǎng) 體系中可以長(zhǎng)期穩(wěn)定快速增殖，具有高度近似人 ES 細(xì)胞的克隆形態(tài)和基因表達(dá)， 長(zhǎng)期維 持正常核型，并在體內(nèi)外具有三胚層分化潛能。

一、 鋪板 1. 提前一天在4℃冰箱中解凍干細(xì)胞鋪底工作液添加劑。

2. 用預(yù)冷的移液管將鋪底工作液添加劑和鋪底工作液基礎(chǔ)液按照 1:9的比例混勻。

3. 將鋪底工作液覆蓋瓶底（6孔板1mL，依次類推），置于37℃培 養(yǎng)箱過夜。

4. 使用前，用PBS洗滌一次。 注意：可根據(jù)試劑用量將鋪底工作液添加劑分裝保存-80℃，避 免反復(fù)凍融。

二、 細(xì)胞復(fù)蘇:

1. 首先開啟復(fù)蘇添加劑小瓶上的鋁蓋，并用酒精棉擦拭其表面， 使用注射器吸取5mL復(fù)蘇基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入到瓶中，顛倒混勻。

2. 將復(fù)蘇添加劑和復(fù)蘇基礎(chǔ)液按照0.5mL：10mL的比例混勻，配 置后的復(fù)蘇CM培養(yǎng)基保存4℃（可保存2周，可根據(jù)試劑用量將 添加劑分裝保存于-80℃，避免反復(fù)凍融）。

3. 37℃水浴中，迅速解凍細(xì)胞，用酒精棉擦拭，轉(zhuǎn)移至無菌操作 臺(tái)中。

4. 將細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至含有5mL復(fù)蘇CM培養(yǎng)基的15mL離心管中 200g離心5min。

5.棄上清，加入適量復(fù)蘇CM培養(yǎng)基，輕柔重懸細(xì)胞，接種到包被 好的培養(yǎng)瓶中。

6. 水平十字搖勻，室溫放置15min.顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞貼壁后 ，放入5%CO 的37℃培養(yǎng)箱中。

7. 培養(yǎng)24h后，棄掉復(fù)蘇CM培養(yǎng)基，加入新鮮的干細(xì)胞CM培養(yǎng)基